优点： 离心法操作方便，同时我们可根据收集到的细胞沉淀来加入适量的裂解液，从而能够控制样品蛋白的浓度。
缺点： 在离心过程中却容易造成细胞破碎而降低总蛋白得率，同时会造成细胞外基质（ECM）的丢失，从而造成样品蛋白质图谱的不完整。
注： 细胞外基质（ECM） 是由细胞外大分子和矿物质（如胶原蛋白、酶、糖蛋白和羟基磷灰石）组成的三维网络，为周围细胞提供结构和生化支持。因为多细胞在不同的多细胞谱系中独立进化，细胞外基质的组成因多细胞结构而异；然而，细胞粘附、细胞间通讯和分化是ECM的常见功能。细胞外基质主要由5类物质组成，即胶原蛋白、非胶原蛋白、弹性蛋白、蛋白聚糖与氨基聚糖，按分布部位划分主要分为基底膜（Basement membrane）和间质基质(Interstitial matrix)
瓶内裂解法
优点： 瓶内裂解法最大的优点是可以有效的防止细胞在离心过程中破碎，能有效的提高总蛋白得率，同时也能完整的保留细胞外基质（ECM）。
缺点： 操作会相对复杂，且不易控制加入的裂解液量，往往会造成总蛋白浓度低且粘度高等情况；对于一些药物处理的细胞和贴壁不牢的细胞，使用此方法在清洗阶段也容易造成细胞大量丢失。
胰酶消化法
优点：胰酶处理的细胞个体形态单一，不聚团，对细胞损伤小。
缺点：会造成细胞外基质（ECM）的完全丢失，同时会剪切一些对胰酶敏感的蛋白，如上图右。
对于WB蛋白样品中是否含有对胰酶敏感的蛋白，我们往往不太确定，同时胰蛋白酶也属于外来蛋白质，如果不能做到彻底清除，同样会污染我们的样本。所以用于WB的细胞样品不建议使用胰酶消化法收集细胞。
看到这里，文首的难题，想必大家已经有了答案。
每一种方法都有自己的优势和局限性，我们要根据自己的细胞类型选择合适的细胞收集方式。
离心法：适用于悬浮细胞、贴壁不牢和药物处理过的细胞；
瓶内裂解法：适用于所有的贴壁细胞；
胰酶消化法：适用于目的蛋白非细胞外基质（ECM）或对胰酶不敏感的蛋白。
在一般情况下，我们首推瓶内裂解法，其次离心法；不推荐胰酶消化法。
02
细胞收集protocol
了解了三个方法的优劣，选择了最合适的细胞收集方法，那具体该如何操作呢？小编这里也给大家准备了瓶内裂解法和离心法的详细Protocol，请查收：
a. 瓶内裂解法（效果最佳）：适用于所有的贴壁细胞
1）吸净培养基，用冰的PBS清洗细胞表面2遍（动作轻柔，防止细胞脱落），尽可能吸取残留的PBS。
2）在冰上加入适量预冷的裂解液于细胞瓶、培养板或培养皿中，用移液管吹散贴壁的细胞，对于贴壁紧的细胞也可使用细胞刮收集，收集裂解液，在冰上放置30min，期间每10min上下颠倒混匀一次。
b. 离心法：适用于悬浮细胞、贴壁不牢和药物处理过的细胞
1）使用细胞刮收集细胞悬液（连同培养基一起收集），4℃，500g离心5min，收集沉淀，沉淀用预冷的PBS洗涤两遍，收集细胞沉淀，尽可能吸取残留的PBS。
2）加入适量的裂解液，在冰上放置30min，期间每10min上下颠倒混匀一次。
注：裂解液在使用前提前加入蛋白酶抑制剂，用于磷酸化抗体检测的需要同时加入蛋白酶抑制剂和磷酸酶抑制剂。
在生物细胞学研究中，有时需要体外培养和分析癌细胞。细胞要养好，就要用好血清，如Ausbian®特级进口胎牛血清，它的内毒素小于3Eu/ml，使细胞更健康，客户做实验更加顺利。
文章来源于：爱维思共享实验中心
本文所用图片及内容均来源于网络收集整理，仅供学习交流，版权归原作者所有，并不代表我站观点。本站将不承担任何法律责任，如果有侵犯到您的权利，请及时联系我们删除。返回搜狐，查看更多